17708430937
17708430937
技術(shù)文章
更新時(shí)間：2017-07-26
點(diǎn)擊次數(shù)：2217
發(fā)酵后的E.Coli培養(yǎng)液 |
|
用低速大容量冷凍離心機(jī)，大容量甩平或角式轉(zhuǎn)頭（3000~6000rpm,30~15min）或高速連續(xù)流轉(zhuǎn)頭（10000～18000rpm，流量300～600ml/min） |
|
E.Coli菌體沉淀 |
|
用溶菌酶破細(xì)胞壁 |
|
用表面活性劑破細(xì)胞膜（如Triton X-100，SDS等） |
|
大部分染色體DNA粘附在膜蛋白上，用一定濃度的鹽溶液（如1 mol NaCl 或1 mol 醋酸鈉）溶解后臺(tái)式高速離心機(jī)（Eppendorf管10000rpm，10min）或高速冷凍離心機(jī)10000～12000rpm×10min，上清中大部分為染色體DNA，沉淀中含質(zhì)粒DNA，降解的質(zhì)粒DNA，RNA及蛋白質(zhì) |
|
| ||
在沉淀中加入異丙醇得到粗制的質(zhì)粒DNA |
| 沉淀中加入TE緩沖液（pH8.0） |
|
|
|
粗制DNA在-20℃在重力狀態(tài)喜愛沉淀15min以上，高速離心機(jī)12000rpm（近15000g）4℃離心5min去上清 |
| 用苯酚抽提去蛋白質(zhì)或用分子篩去蛋白質(zhì)
|
|
| 用RNA酶降解RNA |
真空中抽去異丙醇，溶液中加入TE緩沖液 |
|
|
|
| 過柱（聚丙烯酰胺）RNA留柱，質(zhì)粒DNA過柱 |
加入E.B及Triton X-100,在CsCl中（預(yù)制梯度或平衡等密度離心，自形成梯度）用角轉(zhuǎn)頭，近垂直轉(zhuǎn)頭做超速離心（見文獻(xiàn)10） |
|
|
|
| 較純的質(zhì)粒DNA，但含有5～10%的染色體DNA和降解的DNA片段 |
剩余的蛋白質(zhì)上浮，RNA沉淀，染色體DNA在離心管中上部形成區(qū)帶，質(zhì)粒DNA在離心管中下部形成純樣品區(qū)帶 |
| |
|
|
|
密度梯度儀或其他簡易方法從離心管中抽出，經(jīng)過帶流動(dòng)池的分光光度計(jì)后分部收集，從吸光度峰可以判斷質(zhì)粒DNA所在的位置 |
|
|
|
|
|
去CsCl，去其他組分得到高純度質(zhì)粒DNA | ||
上資料由http://www.xiangzhilxj。。ｃｏｍ/ 長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司轉(zhuǎn)載提供，供您學(xué)習(xí)參考！長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)制造離心機(jī)、實(shí)驗(yàn)室儀器的高科技企業(yè)。公司擁有一批經(jīng)驗(yàn)豐富的工程技術(shù)人員，專業(yè)從事實(shí)驗(yàn)室儀器的設(shè)計(jì)、開發(fā)和生產(chǎn)。公司生產(chǎn)、技術(shù)骨干均是多年從事實(shí)驗(yàn)儀器的精英。公司生產(chǎn)高速冷凍離心機(jī)冷凍離心機(jī);大容量離心機(jī);高速離心機(jī);低速離心機(jī)、脫帽離心機(jī)等產(chǎn)品品種齊全，全系列離心機(jī)實(shí)現(xiàn)無刷化，技術(shù)先進(jìn)、性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠。歡迎垂詢!地 址：湖南省長沙市岳麓區(qū)湘儀路竹馬巷37號 ： 410205 ;
電 話：：李 3367921658網(wǎng) 址：www.xiangzhilxj。。ｃｏｍ
關(guān)于我們
公司簡介 企業(yè)文化 榮譽(yù)資質(zhì)產(chǎn)品分類
高速離心機(jī) 低速離心機(jī) 醫(yī)用離心機(jī)新聞文章
新聞中心 技術(shù)文章聯(lián)系我們
聯(lián)系方式 在線留言 地圖導(dǎo)航0731-88139741
（全國服務(wù)熱線）長沙高新開發(fā)區(qū)望雷大道同心國際工業(yè)園一期工業(yè)廠房A區(qū)7棟
248907359@qq.com
關(guān)注我們
Copyright © 2025長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司 All Rights Reserved 工信部備案號：
技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登錄 sitemap.xml
當(dāng)前位置：
上一個(gè)：
返回列表